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細胞支原體去除試劑——Mynox使用指南

更新時間:2023-09-29  |  點擊率:688

產(chǎn)品名稱:珍貴生物樣品 清除支原體試劑

英文:Mynox® Mycoplasma Elimination Reagent   

品牌:Minerva-Biolabs®    

貨號:10-0200

規(guī)格:2管/盒    


用途

德國Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的Mynox®是一種支原體去除劑,用于消除細胞、病毒培養(yǎng)物、以及其他生物制劑中的支原體。支原體消除只需6 - 8天(加上4代DNA沖洗)。處理后,Mynox®很容易通過介質(zhì)更換去除。


作用原理

Mynox®是一種無抗生素的生物試劑,可以整合到支原體膜中,損害其完整性。它的活性基于生物物理機制,因此不會產(chǎn)生耐藥菌株。其結(jié)果是滲透性內(nèi)流導(dǎo)致支原體膜解體。被清除支原體,細胞可以立即恢復(fù)其原有的形態(tài)和正常增殖速度。迄今為止,Mynox®尚未顯示會導(dǎo)致正常細胞特性的任何變化。



使用方法

一、貼壁細胞的處理方法

1、制備細胞和『治療液』

在無菌的6厘米培養(yǎng)皿中加入2.8 ml含5% (v/v) FCS的標準細胞培養(yǎng)基。加入200µl Mynox®(1瓶)。

加入2ml新鮮胰蛋白酶化的10^4 - 10^5個細胞

包括細胞在內(nèi)的處理混合物的總體積為5ml。

2、Mynox®的處理和去除

在正常生長條件下,將細胞與『治療液』混合物保持一整個傳代過程(約6至8天)。然后除去含有Mynox®的培養(yǎng)基,將細胞在標準培養(yǎng)基中傳代。8天為上限,若細胞未長滿皿底,終止處理,丟棄含有Mynox®的培養(yǎng)基,并添加新鮮的標準細胞培養(yǎng)基。


二、懸浮細胞系的處理

1、制備細胞和『治療液』

使用無菌離心管配制『治療液』。加入1.6 ml 0.125%胰蛋白酶和5 mM EDTA。加入200µl Mynox®(1瓶)。將1.6 ml含有10% (v/v) FCS和10^4 - 10^5細胞的標準細胞培養(yǎng)基,從懸浮細胞培養(yǎng)液中轉(zhuǎn)移到『治療液』混合物中,進行渦旋。包括細胞在內(nèi)的處理混合物的總體積為3.4 ml。

2、Mynox®的處理和去除

37℃孵育30分鐘。將細胞輕離心(600 × g) 5分鐘,丟棄上清。將細胞重懸于不含Mynox®的標準細胞培養(yǎng)基中,置于培養(yǎng)瓶中。


三、非包膜病毒的處理

冷凍或新鮮等量的細胞和無細胞碎片的病毒懸浮液可以處理。病毒滴度不影響治療的成功。

1、制備細胞和『治療液』

使用1.5 ml帶安全鎖的無菌反應(yīng)管配制消毒液。加入1 ml不含F(xiàn)CS的細胞培養(yǎng)基。加入100µl Mynox®。

將含有8% (v/v) FCS的125µl病毒原液轉(zhuǎn)移到混合物中。漩渦。包括病毒原液的處理混合物的總體積為1.225 ml。

2、Mynox®的處理和去除

在室溫下將消去液孵育2小時。將處理混合物在培養(yǎng)基中稀釋1:10,停止反應(yīng)。


四、包膜病毒的處理

包膜病毒外脂膜的組成與Mynox®的靶標支原體膜相當。這些病毒也容易受到Mynox®滅活的影響,具體取決于所使用的處理時間和濃度。為了獲得無支原體的病毒懸浮液,并具有可接受的繼代培養(yǎng)水平,初始病毒滴度應(yīng)高于10^6 TCID50。

冷凍或新鮮等量的細胞和無細胞碎片的病毒懸浮液可以處理。

1、制備細胞和『治療液』

使用無菌15ml螺旋蓋反應(yīng)管配制消去液。加入4.4 ml不含F(xiàn)CS的細胞培養(yǎng)基。加入100µl Mynox®。將0.5 ml含有8% (v/v) FCS的病毒原液轉(zhuǎn)入混合物中。漩渦。包括病毒原液的處理混合物的總體積為5ml。

2、處理和Mynox®去除

在室溫下將消去液孵育30分鐘。將處理混合物在培養(yǎng)基中稀釋1:10,停止反應(yīng)。


五、支原體檢測

經(jīng)Mynox®處理的細胞培養(yǎng)物和病毒庫應(yīng)在不使用抗支原體抗生素的情況下再培養(yǎng)四代,然后檢測支原體是否存在以驗證培養(yǎng)純度。


對于高靈敏度的支原體污染檢測,我們推薦使用基于pcr的Venor®GeM支原體檢測試劑盒


注意事項

??確保只處理單個細胞(在顯微鏡下檢查!)如有必要,增加胰蛋白酶處理的持續(xù)時間或通過上下移液機械分解細胞團塊。

??先加入Mynox®,然后將細胞放入培養(yǎng)基中。將細胞直接加入『治療液』中(將吸管頭直接插入『治療液』中!)

??在治療過程中,應(yīng)經(jīng)常觀察細胞,檢查細胞毒性作用,如果明顯注意到細胞狀態(tài)變差,應(yīng)立即停止治療,更換培養(yǎng)基或用培養(yǎng)基1:5稀釋混合物。

??在渦旋過程中,請確保治療液濕潤離心機管的整個內(nèi)表面。

??去除病樣品中的支原體前,檢測宿主細胞系是否受支原體污染。



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