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細(xì)胞培養(yǎng)基中雙抗?jié)舛仁嵌嗌??該怎樣添加?/h1>
更新時間:2023-05-26  |  點擊率:955

細(xì)胞培養(yǎng)基中,將常會添加“雙抗"用于預(yù)防微生物污染。細(xì)胞培養(yǎng)過程中用到的雙抗,一般是指青霉素和鏈霉素的組合。主要作用于細(xì)菌的細(xì)胞壁與核糖體。由于真核細(xì)胞沒有細(xì)胞壁以及核糖體與原核細(xì)胞不同,抗生素一般對真核細(xì)胞培養(yǎng)無害。

 

在細(xì)胞培養(yǎng)液中,一般推薦的青霉素的工作濃度為100U/ml,鏈霉素的工作濃度為0.1mg/ml。在使用時,按需配制或稀釋即可。另外,需要注意的是,抗生素對熱環(huán)境比較敏感,因此應(yīng)在-20℃環(huán)境下長期保存,在2-8℃可短期保存,配制成培養(yǎng)液后應(yīng)在一周內(nèi)用完。

 

雖然在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,雙抗被廣泛使用,并且認(rèn)為對真核細(xì)胞無害,但已有研究表明,β-內(nèi)酰胺類抗生素及氨基糖甙類抗生素,對真核細(xì)胞培養(yǎng)有抑制增殖作用。并且這種抑制增殖作用在原代細(xì)胞和干細(xì)胞等難養(yǎng)細(xì)胞上尤其明顯。2017年,加州大學(xué)Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上發(fā)表文章,呼吁在細(xì)胞培養(yǎng)過程中減少抗生素的使用[4]。他們發(fā)現(xiàn)抗生素(雙抗":青霉素和鏈霉素)的使用影響人體肝細(xì)胞中基因表達(dá)與基因調(diào)控。其中有209個基因的表達(dá)發(fā)生了改變,特別是與藥物和應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)的基因。超過9,500個基因調(diào)控元件發(fā)生了變化,并且很多調(diào)節(jié)元件位于參與細(xì)胞分化,核酸酶活性和tRNA修飾的基因附近。雖然這些基因的數(shù)量在龐大的細(xì)胞基因庫中不值一提,但這絕對不是一個應(yīng)該被忽略的事件。

 

因此,在細(xì)胞實驗中,應(yīng)減少“雙抗"的使用,可通過其他方式,預(yù)防細(xì)胞發(fā)生污染。定期用支原體祛除試劑清潔、擦拭實驗臺;合理的消毒;規(guī)范的實驗操作等,都有利于預(yù)防細(xì)胞污染。

德國MB支原體預(yù)防試劑,Mycoplasma-off,不僅能祛除支原體,對其他微生物也有效。


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