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“ 科研中,如何快速檢測SARS-CoV-2?“

更新時間:2022-11-01  |  點擊率:708



  一、產(chǎn)品用途:

  新guan病毒RT-qPCR引物/探針(套裝)(英文名:SARS-CoV-2 Confirm),用于定性檢測和分析新guan病毒RNA。它僅用于研究,不用于臨床診斷。

  品名貨號/規(guī)格存儲

  新guan病毒RT-qPCR引物/探針(套裝)

  英文名:SARS-CoV-2 Confirm

  品牌:德國MB公司(Minerva Biolabs)271-2100

  100個反應/盒2-8℃避光。

  凍干粉復溶后在-18℃以下保存

  二、產(chǎn)品描述:

  1. 該產(chǎn)品包括三個小管:


 ?、俪壬w: 2019-n CoV Mix(凍干粉),1管。

  此管為新guan病毒引物/探針,可特異性擴增新guan病毒的RdRp基因(即RNA依賴性RNA聚合酶基因),而其他冠狀病毒RNA不會被檢測到【1】【2】。(該引物/探針依據(jù)WHO診斷參考實驗室公布的新guan病毒引物/探針序 列而設計【1】。更多詳情可訪問:

  

  如要檢測其他冠狀病毒,推薦MB公司提供的其他冠狀病毒引物/探針,品名:CoV Screen (without ConviFlex™RT-Taq Mix),貨號:271-1100。

 ?、诰G蓋:Positive Control RNA(陽性對照RNA,凍干粉),1管。

  此陽性對照RNA為一段合成的RNA序列(序列來自武漢的病毒株)。

 ?、郯咨w:PCR Grade Water(液體),1管。

  2.使用前,①橙蓋和②綠蓋先用PCR級水(③白蓋)復溶,并分裝,避免反復凍融。

  3.該引物/探針應與MB公司提供的【RNA病毒檢測試劑盒】(英文名:ConviFlex™RT-Taq Mix,貨號192-0025/-0100/-0250)一起使用,用于新guan病毒RT-qPCR反應檢測。

  4.檢測樣本需為抽提過的RNA樣本。

  5.新guan病毒的靶基因RdRp是用FAM™通道檢測,擴增的人RNA酶P基因(過程對照)用ROX™通道檢測,用以評估樣本的制備質(zhì)量。

  三、產(chǎn)品特點:

  1. 靶點特別。依據(jù)WHO國際標準,此引物探針為新guan病毒RdRp基因,而非市面上常見的ORF1ab和N基因或E基因。

  2.陽性對照RNA為一段合成的RNA序列。

  3. 主要組分為凍干粉,4℃保存,儲存運輸方便,性能穩(wěn)定。

  4. 適用于科研中,各種來源的RNA樣本,包括拭子、活檢組織、哺乳動物細胞和細菌等。

  四、需用戶自己準備的試劑耗材和儀器:

  1. RNA病毒檢測試劑盒(RT-qPCR法)(英文名:ConviFlex™ RT-Taq Mix,貨號192-0025/-0100/-0250)

  2. 熒光定量PCR儀(qPCR儀)

  3. 無DNase和RNase的qPCR反應管

  4. 離心機

  5. 移液器及帶濾芯吸頭(不含DNase和RNase)

  6. 用戶自己提取的RNA或現(xiàn)成的RNA樣品。(抽提過程建議使用商品化的RNA提取試劑盒完成,如MB廠家的:【病毒RNA提取試劑盒】(ExtractNow™ Virus RNA Kit,貨號611-1010/-1050/-1250)或【病毒RNA拭子提取試劑盒】(ExtractNow™ Virus RNA Swab Kit,貨號611-2250)。

  五、操作注意事項:

  1. 該引物/探針應僅由經(jīng)過培訓的實驗室人員使用。

  2. 始終穿上合適的防護服和戴一次性手套。

  3. 根據(jù)樣品類型,應謹慎處理所有樣品。

  4. 請遵循WHO推薦的方法處理樣本。

  5. 該試劑盒不含有害物質(zhì)。殘余物可以根據(jù)當?shù)胤ㄒ?guī)丟棄。

  六、操作步驟:

  步驟1. 試劑制備:包括試劑溶解等預處理步驟

  步驟2. RT-qPCR引物/探針mix制備

  步驟3. 設置qPCR程序

  步驟4. 啟動程序

  步驟5. 數(shù)據(jù)解讀

  FAM™ 通道ROX™ 通道 說明

  陽性陽性檢測到SARS-CoV-2 RNA

  陽性陰性檢測到SARS-CoV-2 RNA

  陰性陽性未檢測到SARS-CoV-2 RNA

  陰性陰性結果無效

  七、使用注意事項:

  1. 使用前應認真閱讀說明書。

  2. 來自不同批次的試劑不能混合。

  3. 試劑盒內(nèi)的試劑應始終作為一個整體溶解分裝。

  4. 試劑盒應在效期內(nèi)使用。

  5. 每次PCR至少應設置一個陽性對照。每次PCR至少應設置一個陰性對照和/或一個無模板對照。

  6. 建議在無RNA和DNA污染的條件下進行RT-PCR,以避免操作過程中DNA或非特異RNA的交叉污染。(MB公司推薦使用PCR污染祛除噴霧,英文名:PCR Clean™,貨號15-2025,預先清潔實驗環(huán)境。)

  7. 盡量減少RNA樣品的凍融次數(shù),同時避免RNA酶污染,以減少RNA降解的風險。(RNA降解會極大地限制了RT-qPCR反應的性能)。請確保高質(zhì)量的完整RNA用于檢測。

  8. 樣本制備過程中,注意避免其他DNA的污染,DNA的干擾也會降低qPCR的準確性。


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