今天我們書(shū)接上回，接著講講另外3個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。

公共設(shè)備可能存在問(wèn)題

儀器的參數(shù)

也會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)

如果細(xì)胞不存在污染，培養(yǎng)體系沒(méi)有瑕疵、細(xì)胞初始狀態(tài)也沒(méi)有問(wèn)題，那么可以考慮公共儀器設(shè)備是否存在紕漏。

常見(jiàn)有水浴鍋溫度、室內(nèi)溫度及濕度、培養(yǎng)箱參數(shù)、水浴鍋溫度等。

水浴鍋是細(xì)胞培養(yǎng)室常用的儀器，要定期用溫度計(jì)對(duì)其工作溫度進(jìn)行檢查，觀察是否存在溫度不準(zhǔn)、溫度驟變的情況。另外要強(qiáng)調(diào)一點(diǎn)，水浴鍋也是常見(jiàn)的污染源之一，水浴鍋中的水最好使用無(wú)菌水，并定期做好清潔工作，推薦大家使用MB WaterShield，可以有效清除、預(yù)防水槽中的支原體，方便安全、省時(shí)省力省心。

 

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的溫度及濕度：儀器還是操作對(duì)溫度沒(méi)有特殊要求，維持舒適的溫度即可，比如18~26℃；過(guò)高的濕度會(huì)導(dǎo)致微生物的滋生，所以建議正常維持濕度在70%以下。應(yīng)定期用溫度濕度測(cè)試儀對(duì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，以防溫控系統(tǒng)出現(xiàn)故障。

培養(yǎng)箱參數(shù)：一般哺乳類(lèi)與禽類(lèi)細(xì)胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃；大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開(kāi)放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳?xì)怏w比例為宜。但在實(shí)際操作過(guò)程中，細(xì)胞培養(yǎng)箱有可能會(huì)出現(xiàn)以下故障，影響細(xì)胞培養(yǎng)體系，進(jìn)而使細(xì)胞生長(zhǎng)變得緩慢：

• 溫度和溫度設(shè)定不準(zhǔn)；

• 細(xì)胞培養(yǎng)箱濕度不能維持；

• 細(xì)胞培養(yǎng)箱的二氧化碳濃度不準(zhǔn)。

對(duì)應(yīng)解決方法給大家整理好，建議大家保存，以備不時(shí)之需。

實(shí)驗(yàn)人員可能發(fā)生變化

細(xì)胞“飼養(yǎng)員”的更換

也可能影響細(xì)胞生長(zhǎng)速率

作為一名合格的細(xì)胞“飼養(yǎng)員”，一定要預(yù)先了解所養(yǎng)細(xì)胞的“習(xí)性”：用哪種培養(yǎng)法、使用何種類(lèi)型培養(yǎng)體系（血清種類(lèi)、基礎(chǔ)培養(yǎng)基類(lèi)型、是否添加生長(zhǎng)因子以及抗生素等），盡可能還原初始的培養(yǎng)環(huán)境，讓細(xì)胞有個(gè)適應(yīng)的過(guò)程。另外，實(shí)驗(yàn)者自身也要注意操作規(guī)范，按照標(biāo)準(zhǔn)流程培養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)試劑可能發(fā)生改變

培養(yǎng)用的試劑

也可能會(huì)是影響因素

不同品牌的試劑可能會(huì)有些許差別，對(duì)于一些比較嬌貴的的細(xì)胞，這些細(xì)微的差別很可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)受到影響。因此我們一直強(qiáng)調(diào)大家“追本溯源”，盡可能用與原來(lái)一致的培養(yǎng)條件。

如果要更換試劑，建議大家先做個(gè)對(duì)照試驗(yàn)，看看新的試劑對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有沒(méi)有影響。

另外，除了以上這六點(diǎn)，還有一點(diǎn)需要特別注意，就是：

細(xì)胞的代次

一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞傳代次數(shù)是一定的（一些癌細(xì)胞系屬于特例），特別是像間充質(zhì)干細(xì)胞這類(lèi)對(duì)代次比較敏感的細(xì)胞，需要格外注意，傳代次數(shù)過(guò)高后（10-15代左右），細(xì)胞生長(zhǎng)速率也會(huì)明顯減慢。在實(shí)驗(yàn)時(shí)，盡量選擇代次較低且狀態(tài)穩(wěn)定的細(xì)胞。