對于細胞培養(yǎng)而言，血清的重要性顯而易見。它含有包括生長因子在內(nèi)的蛋白、氨基酸、脂類、碳水化合物、維生素及其他成份，可以促進貼壁或懸浮細胞的生長和維持。胎牛血清（FBS）是細胞培養(yǎng)常用的血清。

隨著生物學研究的迅猛發(fā)展，對血清的需求也越來越多，加上進口運輸成本增加等等各種原因，進口血清的價格在國內(nèi)也是悄悄地蹭蹭地，站到了“不菲”的價位。

使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鐘。滅活的目的是去除血清中的補體成分，避免補體對細胞產(chǎn)生毒性作用。血清經(jīng)過滅活也會損失一些對細胞有利的成分，如生長因子，因此也有人提出血清不經(jīng)滅活直接用于培養(yǎng)，這樣做的前提是確認血清中不含補體成分。對于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細胞培養(yǎng)。

儲存條件：血清一般儲存于－20℃，同時應避免反復凍融。購買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前融化。融化時最好現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時間存放，應盡快使用。

使用濃度：自從有了合成培養(yǎng)基，血清就是作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用，使用濃度一般為5－20％，常用是10％。過多血清容易使培養(yǎng)中的細胞發(fā)生變化，特別是一些二倍體的無限細胞系，迅速生長之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。 采購血清時，最好先從供應商處索取樣品進行試驗，選定一批后就要保留足夠使用6個月至1年的量，直至用另一批經(jīng)過預先試驗的樣品代替。

 

與4℃過夜法相比,三步法為什么對血清更好呢？重點有二！

其一：關系到沉淀出現(xiàn)的幾率！

記得嗎？血清在融化過程中，瓶子里冰塊的底部你會看見亮亮的蛋白絲在下沉，如同蜂蜜溶于水時的亮線，這就是血清中大量的蛋白在快速融化，而水的熔點高于蛋白，融化的速度是比蛋白慢的。（回想一下高級冰淇淋和大棒冰的區(qū)別，你懂得?。┰囅耄绻捎?℃過夜的方法，1瓶500毫升的血清融化好，大約需要10小時左右，蛋白先融化，沉降在瓶子的底部，水融化的速度比蛋白慢，于是造成大量蛋白溶于少量的水，此時就很容易有一些蛋白飽和析出，（大多是脂蛋白和纖連蛋白），這就是血清融化中產(chǎn)生沉淀的重要原因之一。

采用三步法，只要2.5個小時，溫和有效地加快了水融化的速度，另一方面，融化過程中可以間斷輕輕搖擺瓶子，讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節(jié)約了時間，而且最大限度減少了血清沉淀出現(xiàn)的幾率。

 

血清融化過程中，蛋白質(zhì)會比水先融化。冰塊底部亮亮的細絲就是融化中的蛋白

其二：血清在培養(yǎng)細胞中，最重要的是利用它的活性的因子，因此，融化過程中最大限度地保留因子的活性，就變得非常重要?；貞浺幌?，細胞復蘇時，要保持細胞的活性，我們是要遵循“快融”原則還是“慢融”原則呢？快融！血清同樣如此！三步法需要兩個半小時，4℃過夜需要大約10個小時（冰箱一般設2-8℃，所以各實驗室融化時間會稍有出入）。哪個速度對保留活性更好？不言而喻！

下面，我們詳細解讀『血清的三步融化法』的步驟：

 

圖：剛從-28℃拿出的血清，是這個樣子的

融化血清第一步

溫度：室溫

時間：100ml - 35分鐘

500ml - 90分鐘

1000ml - 100分鐘

或

溫度：15-20℃水?。ㄐ陆拥淖詠硭?4℃上下）

時間：100ml - 5分鐘

500ml - 18分鐘

1000ml - 20分鐘

 

圖：這是最近Ausbian血清的大區(qū)經(jīng)理周博，在天津血研所實驗室拍到的——實驗人員三步法化血清的圖片，為了節(jié)約時間，實驗人員采取的是第一步20℃水浴18min的方法。（用現(xiàn)接的自來水放入冰凍的血清，即可達到20℃水浴的效果。一般實驗室沒有能制冷到20℃的水浴鍋）

融化血清第二步

溫度：20℃水?。ㄐ陆拥淖詠硭?4℃上下）

時間：100ml - 15分鐘

500ml - 25分鐘

1000ml - 30分鐘

 

圖：第二步，仍舊是新接的自來水浴，25min

融化血清第三步

溫度：37℃水浴

時間：100ml - 20分鐘

500ml - 35分鐘

1000ml - 45分鐘

 

第三步，將血清置于37℃水浴鍋中進行融化，大約30nmin左右，血清就*融化，可以分裝了。

 

 

圖：大家看，使用三步法融化的血清十分清亮，養(yǎng)細胞的效果也是棒棒噠。

注意

1.在水浴過程中，血清的平面要*浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動，使血清混勻，但不要產(chǎn)生泡沫！

2.胎牛血清不推薦熱滅活。

3.此三步法適用于所有品牌、所有級別的進口或國產(chǎn)血清，均可讓血清在減少沉淀、保留活性、提高細胞培養(yǎng)效果方面，得到不同程度的提高！

看到這里，你是不是迫不及待的想試試融化血清的三步法了呢？其實，想快速得到高品質(zhì)的血清，除了科學的融化方法，自身品質(zhì)出眾的血清，完備的運輸冷鏈，貼心的售后服務，這些都是*的！

Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠前，均經(jīng)過嚴格質(zhì)控，每個批次附有詳細完整的《檢測報告》，包括：品名，貨號，批號，血源地，生產(chǎn)日期，保質(zhì)期，pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無菌檢查（細菌、真菌、支原體）、病毒檢查（如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應等）、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

實驗人對于新批次血清，應認真審閱《檢測報告》，做好試用前篩選第一步。（如何看懂《檢測報告》，可登陸“締一生物”網(wǎng)站，留言技術部，得到免費幫助。）

 

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