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教你一招:細(xì)胞被支原體污染后的處理辦法

更新時(shí)間:2022-07-14  |  點(diǎn)擊率:972

細(xì)胞被支原體污染,解決方案

方法一:確認(rèn)細(xì)胞已被支原體污染,終止試驗(yàn),丟棄所有被污染的細(xì)胞和耗材。

重新復(fù)蘇細(xì)胞,注意選用未被污染的細(xì)胞株、血清和培養(yǎng)基,并規(guī)范操作。

方法二:對于珍貴的,樣品不可再得的細(xì)胞,或價(jià)格昂貴的種子細(xì)胞,不但無法丟棄,而且作為種子細(xì)胞,還需要*祛除支原體污染。

此時(shí),需選用特異性的支原體殺除劑,清除污染,保護(hù)細(xì)胞。


Mynox®。試劑可在2-3小時(shí)內(nèi)將支原體主動(dòng)殺除。特別適合細(xì)胞保種。

Mynox®為枯草桿菌中提取出的生物制劑,加入培養(yǎng)液中,可特異性地與支原體膜結(jié)合,改變膜通透性。通過此生物物理的方法,2~3小時(shí)內(nèi),即可把細(xì)胞中的支原體殺除掉。因?yàn)榧?xì)胞膜結(jié)構(gòu)與支原體膜不同,故Mynox®不會(huì)與細(xì)胞膜結(jié)合,因此無細(xì)胞毒性。

注意:3小時(shí)后,需將此試劑洗脫,將細(xì)胞更換到新的培養(yǎng)耗材和培養(yǎng)液中,重新培養(yǎng)。

此時(shí),不應(yīng)使用PCR方法檢測細(xì)胞中支原體。由于支原體解體,故PCR結(jié)果為假性強(qiáng)陽性。

Mynox®殺除支原體功能強(qiáng)大有效,但價(jià)格較貴。

方法三:對于已耗費(fèi)很多時(shí)間,大量擴(kuò)增起來的細(xì)胞,或經(jīng)過基因轉(zhuǎn)染、體外刺激等大量工作處理過的細(xì)胞,如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被支原體污染了,怎么辦?此時(shí)由于前期工作量巨大,使操作人員無法丟棄已有細(xì)胞。

但由于價(jià)格原因,又無法使用方法二提到的昂貴試劑殺除細(xì)胞上的支原體,

同時(shí),實(shí)驗(yàn)人員還需要清除細(xì)胞上的支原體污染,讓實(shí)驗(yàn)得以往下推進(jìn),以最終獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

此時(shí),實(shí)驗(yàn)者可選用對支原體很好的抑制劑,通過對細(xì)胞的前期處理,中期加藥,逐步通過4代左右的培養(yǎng),得以將支原體污染*清除,確保試驗(yàn)順利推進(jìn),結(jié)果準(zhǔn)確。

世界此類試劑眾多,筆者周圍的實(shí)驗(yàn)人做過很多嘗試,其中效果最確切且性價(jià)比較高的當(dāng)屬德國Minerva公司的ZellShield®祛除劑。

它的原理是:通過抑制支原體增殖中DNA和蛋白的合成,達(dá)到抑制新的支原體增殖的目的。屬復(fù)合型的新型抗生素。

注:使用ZellShield®時(shí),不需使用鏈青霉素。


操作步驟:

第一步:研究發(fā)現(xiàn),98%的支原體污染發(fā)生在細(xì)胞間隙。因此,首先要把細(xì)胞消化下來,放入離心管,懸浮沖洗,離心,棄上清,反復(fù)三次。此時(shí)可將細(xì)胞上大部分的支原體去除,為進(jìn)一步加藥抑制做好準(zhǔn)備。

第二步:培養(yǎng)液中加入1%的ZellShield®,細(xì)胞進(jìn)行正常培養(yǎng)。新的支原體增殖受到抑制,舊的支原體隨著細(xì)胞的換液逐步減少,通過4代左右的培養(yǎng),細(xì)胞中的支原體基本可被*清除。


有些細(xì)胞保種中心,當(dāng)珍貴細(xì)胞被支原體污染后,會(huì)將Mynox®和ZellShield®結(jié)合使用,效果確切,結(jié)果令人滿意。


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