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培養(yǎng)基滅菌方法

更新時間:2022-05-16  |  點擊率:4582

培養(yǎng)基的滅菌方法

1、高壓蒸汽滅菌:

高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養(yǎng)基在愛制備過程中混入各種雜菌,分裝后應立即滅菌,至少應在24h內(nèi)完成滅菌工作。滅菌時一般是在0.105MPa壓力下,溫度121℃時,滅菌15~30min即可。消毒時間不宜過長,也不能超過規(guī)定的壓力范圍,否則有機物質(zhì)特別是維生素類物質(zhì)就會在高溫下分解,失去營養(yǎng)作用,也會使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色,甚至難以凝固。將蒸餾水或自來水裝在三角瓶中,裝水量一般不超過瓶的2/3,用牛皮紙或硫酸紙包扎封口,然后放入高壓鍋中滅菌后即為無菌水。 滅菌后的培養(yǎng)基可放到培養(yǎng)室中預培養(yǎng)3d,若無污染現(xiàn)象,則證明滅菌是*的,可以使用。暫時不用的培養(yǎng)基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培養(yǎng)基應在1周內(nèi)用完,其他培養(yǎng)基最多也不要超過1個月。

2、過濾滅菌:

一些植物生長調(diào)節(jié)劑及有機物,如IAA、GA3、ZT、CM等,遇熱容易分解,不能與培養(yǎng)基一起進行高溫滅菌,而要使用細菌過濾器濾去其中的雜菌。細菌過濾器與濾膜(孔徑0.45微米)使用之前要先進行高壓滅菌。過濾后的溶液要立即加入培養(yǎng)基中,若為液體培養(yǎng)基,可在培養(yǎng)基冷卻至30℃時加入;若為固體培養(yǎng)基,必須在培養(yǎng)基凝固之前(50-60℃)加入,振蕩使溶液與其他成分混合均勻。

處理細胞培養(yǎng)工作區(qū)域的支原體


這里的工作區(qū)域包括實驗臺、超凈臺、培養(yǎng)箱(水槽除外)、液氮罐、移液器、門把手等細胞培養(yǎng)的環(huán)境。

使用德國MB公司生產(chǎn)的支原體祛除噴霧或濕巾(品名:Mycoplasma-off™),可在5-10分鐘清除支原體,高效快速,操作方便。


產(chǎn)品特點及原理:

1)快速有效

噴霧劑和濕巾中含有支原體專用殺除劑Mynox®,可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。

與傳統(tǒng)的化學試劑熏蒸方法相比,更加安全;與傳統(tǒng)酒精處理、紫外線照射方法相比更有效!

2)廣譜抗菌

不僅能去除支原體,而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

3)無腐蝕性和致癌性

乙醇作為溶劑,無腐蝕性和致癌性成分。

4)操作簡便

即用型消毒液,可以快速簡單地保持工作區(qū)的清潔干凈。


使用方法及步驟:

培養(yǎng)基滅菌方法


噴霧劑:

注:對于細胞培養(yǎng)箱,內(nèi)部噴灑支原體祛除噴霧或用濕巾擦拭后,應打開箱門通風至少1小時。如培養(yǎng)箱帶熱滅活功能,可開啟該功能以替代風干。

培養(yǎng)基滅菌方法


濕巾:

對于移液器,門把手,電子設(shè)備等,可使用支原體祛除濕巾。擦拭后,應讓其被消毒物體的表面保持濕潤,再讓其自然風干。


培養(yǎng)箱水槽和水浴鍋中預防支原體污染的方法


細胞培養(yǎng)環(huán)境中,培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋經(jīng)常會有支原體以及各種細菌、霉菌滋生,稍有不慎或清洗不及時,水槽中的水源即會成為細胞污染的重要來源。


保持水槽的潔凈,對細胞培養(yǎng)的順利進行非常重要。


推薦全球眾多實驗室日常都在使用德國MB公司生產(chǎn)的Water Shield支原體污染防護劑(水槽用)。Water Shield可持續(xù)作用四周,使水源避免受到支原體、細菌、酵母、霉菌和孢子的污染。


產(chǎn)品特點:

1)長效。Water Shield含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò)合劑,不易揮發(fā),可持續(xù)作用4周。

2)安全。不含醛類或疊氮化物,對細胞無毒害。

3)廣譜。預防支原體、細菌、酵母菌、霉菌和孢子污染。

4)方便。Water Shield按1:200比例,直接加入水中,使用方便。

5)不產(chǎn)生水垢。


操作步驟:

1)Water Shield和蒸餾水可直接加入培養(yǎng)箱水槽或水浴鍋中。

2)Water Shield按1:200比例使用,例如:1000ml蒸餾水+5ml Water Shield,或10L蒸餾水+50ml Water Shield。

3)4周左右清洗水槽,換水,重新加入Water Shield。

培養(yǎng)基滅菌方法


注意事項:

避免吸入。眼睛接觸或長時間皮膚接觸可能會產(chǎn)生刺激性。因而,使用試劑時應戴上護目鏡和一次性手套。一旦皮膚接觸,應用大量水沖洗。

Water Shield對玻璃、陶瓷、塑料、橡膠、鋼制品、貴金屬和其他金屬安全性良好


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