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你知道細(xì)胞培養(yǎng)操作過程有什么嗎?

更新時間:2022-04-29  |  點擊率:936

注意無菌。無論哪一管液體,開蓋后盡量立即關(guān)上(如果有幾瓶都需要開的,也注意,可以虛蓋)。蓋子向上放。操作時不要從開蓋的容器上方經(jīng)過。另外,無菌臺面上擺放的各種東西,最好是一字?jǐn)[開,平行于自己。盡量不要前后重疊。

細(xì)胞操作中所用的所有耗材試劑最好都是細(xì)胞培養(yǎng)專用。一般都以一次性耗材居多。1ML槍頭為加長型專用培養(yǎng)槍頭。移液管亦有專用10mL一次性無菌移液管

(1)細(xì)胞換液:

培養(yǎng)皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養(yǎng)液,加入新培養(yǎng)液。

(2)細(xì)胞傳代:

傳代之前先觀察,細(xì)胞是否密集,是否開始融合。一般融合達(dá)到70-80%就可以傳代。早點傳代也可以。

如果是貼壁生長的細(xì)胞:

1) 培養(yǎng)皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養(yǎng)液;

2) 無菌PBS或無菌生理鹽水洗滌3次(按培養(yǎng)體積加入);

3) 加入適量胰酶消化適當(dāng)時間(一般胰酶為0.25%;9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶,一次加入1mL胰酶。消化時間視細(xì)胞類型等多種情況綜合考慮,一般如果是細(xì)胞株,非原代培養(yǎng),消化1-2分鐘足矣);

4) 用槍頭吹打數(shù)十次(視細(xì)胞類型而定。一般細(xì)胞株30-50次吧,耗時一般2分鐘左右);

5) 加入適量體積*培養(yǎng)基終止胰酶消化(如果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶,可以加入1mL*培養(yǎng)基;現(xiàn)在培養(yǎng)瓶(皿)里有2mL溶液)。

6) 現(xiàn)在可以將溶液進(jìn)行分瓶(2mL)。如果是細(xì)胞株,直接均分到兩個培養(yǎng)瓶(皿)里。如果是原代培養(yǎng),可以根據(jù)消化時間來對細(xì)胞進(jìn)行分離;因此可以將溶液(2mL)都轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶(皿)。

7) 將兩個培養(yǎng)瓶(皿)補足*培養(yǎng)基到正常體積(果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶,為5mL*培養(yǎng)液)

8) 鏡下觀察。剛剛傳代細(xì)胞還沒貼壁,懸浮在溶液中,呈圓形。一般2h之內(nèi)會貼壁,如果已經(jīng)貼壁,根據(jù)細(xì)胞類型有不同的形態(tài),但通常都不是圓形。

9) 鏡下觀察無誤之后,再放入細(xì)胞培養(yǎng)箱。培養(yǎng)瓶(皿)放入之前,可以用消毒酒精先擦一下。

10) 傳代之后,最好第二天細(xì)胞換液一次。當(dāng)然,也可以視情況而定。

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