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細(xì)胞培養(yǎng)之血清解凍的正確方法

更新時(shí)間:2022-03-18  |  點(diǎn)擊率:1545

今天來(lái)給大家介紹細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,血清解凍的正確方法。

首先,剛拿到的血清,為保證血清中各種細(xì)胞因子的活性,應(yīng)趕緊放進(jìn)-20℃冰箱中,避免反復(fù)凍融。

當(dāng)需要使用血清時(shí),從-20℃冰箱中取出后,許多人會(huì)采用直接在4℃冰箱里過(guò)夜融化的方法,但在實(shí)際操作中,很多人會(huì)碰上血清出現(xiàn)沉淀或者由于血清中因子活性發(fā)生波動(dòng),而導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)生波動(dòng)等各種問(wèn)題。

關(guān)于沉淀析出的原理:

我們都知道,在血清是含有多種大小分子蛋白以及水的混合物。當(dāng)血清融化時(shí),各種成分融化的速度會(huì)非常不同:蛋白質(zhì)等干物質(zhì)會(huì)先融化,水這類溶劑會(huì)相對(duì)滯后地融化。因此,在血清融化后半程,我們經(jīng)常會(huì)看到,在瓶子中間剩下一根白色或無(wú)色的冰柱,這說(shuō)明大量蛋白已融化,而水還沒(méi)化完,此時(shí)大量蛋白溶于少量的水,沉積在瓶子的底部,有的蛋白質(zhì)就會(huì)飽和析出,呈現(xiàn)上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài),而一旦析出,有的蛋白就很難再溶解回去

在使用過(guò)程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過(guò)高等問(wèn)題,影響細(xì)胞生長(zhǎng)。


更重要的一點(diǎn)是,血清中珍貴的生長(zhǎng)因子等活性物質(zhì),它們?cè)诮鈨鲞^(guò)程中,有著與細(xì)胞復(fù)蘇類似的經(jīng)歷,都需要快速解凍才能較大程度地保留生物活性。顯然,4℃過(guò)夜這樣的長(zhǎng)時(shí)間處理,很易導(dǎo)致一部分「營(yíng)養(yǎng)成分」的損失,影響細(xì)胞生長(zhǎng)。


所以,為了更好地保留血清中的活性成分,使細(xì)胞培養(yǎng)更穩(wěn)定,國(guó)際上一直推薦使用三步法融化,可最大限度減少沉淀出現(xiàn),保留血清中因子的活性。具體方法見(jiàn)下表,有需要的同學(xué)可以截圖保存。


要點(diǎn)一:此三步融化法,適用于所有血清,在水浴過(guò)程中,血清的平面要盡量*浸在水中,但瓶口不要沒(méi)入水中,防治瓶口污染。在融化過(guò)程中要最好經(jīng)常慢慢搖動(dòng)瓶身,使血清混勻,但搖動(dòng)不要?jiǎng)×?,盡量不要產(chǎn)生泡沫!


要點(diǎn)二:如果你的血清平時(shí)是儲(chǔ)存在-80℃的血清,融化前則需提前幾天先轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中復(fù)溫(至少24小時(shí)),再使用三步法溶解,避免溫差過(guò)大,更易導(dǎo)致血清中蛋白凝集。


要點(diǎn)三:為最大限度保留血清中因子的活性,減少凍融次數(shù),血清應(yīng)遵循現(xiàn)用現(xiàn)配,現(xiàn)配現(xiàn)解凍的原則。*解凍的血清,應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,將其分裝,保證每一份夠一次使用量即可,比如:25ml/管、50ml/管等。分裝好的血清,密封好后,立即放回-20℃冰箱繼續(xù)冷凍儲(chǔ)存。需要配制培養(yǎng)基的時(shí)候,再?gòu)?20℃冰箱中取出一管來(lái)盡快解凍使用(最好能全部配成培養(yǎng)基,不要有剩余),配好的培養(yǎng)基在4℃冰箱儲(chǔ)存最好不超過(guò)一周。


好血清,正確用,以市面上*好用的Ausbian品牌進(jìn)口血清為例,十幾年來(lái)的好口碑,與十幾年不遺余力地推廣血清的正確使用方法是分不開(kāi)的。

選對(duì)好血清,會(huì)讓細(xì)胞養(yǎng)得好,用對(duì)正確的方法,會(huì)讓次次細(xì)胞都養(yǎng)得好!

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