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細(xì)胞傳代培養(yǎng)的原理及操作步驟-胎牛血清助力科研實(shí)驗(yàn)

更新時(shí)間:2021-10-25  |  點(diǎn)擊率:1220

細(xì)胞傳代培養(yǎng)原理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后,已基本上飽和,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng),同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大,就必須進(jìn)行傳代(再培養(yǎng))。

傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

細(xì)胞傳代培養(yǎng)具體操作

1、材料和試劑的準(zhǔn)備

1)細(xì)胞:貼壁細(xì)胞株

2)試劑:0.25%胰酶、1640培養(yǎng)基(含10%小牛血清)

3)儀器和器材:倒置顯微鏡,培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等

2、操作步驟

1)將長(zhǎng)滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去。

2)加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。

3)瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時(shí)間的推移,原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時(shí)將胰酶棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。

觀察消化也可以用肉眼,當(dāng)見(jiàn)到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)終止消化。一般室溫消化時(shí)間約為1—3分鐘。

4)用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。

科研實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級(jí)胎牛血清,它適合各種細(xì)胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞,如:干細(xì)胞、肝細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。

Ausbian®特級(jí)胎牛血清所有血清出廠前,均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)控,每個(gè)批次附有詳細(xì)完整的《檢測(cè)報(bào)告》,包括:品名,貨號(hào),批號(hào),血源地,生產(chǎn)日期,保質(zhì)期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無(wú)菌檢查(細(xì)菌、真菌、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細(xì)胞病變效應(yīng)等)、促細(xì)胞生長(zhǎng)能力、細(xì)胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

實(shí)驗(yàn)人對(duì)于新批次血清,應(yīng)認(rèn)真審閱《檢測(cè)報(bào)告》,做好試用前篩選第一步。(如何看懂《檢測(cè)報(bào)告》,可登陸“締一生物"網(wǎng)站,留言技術(shù)部,得到免費(fèi)幫助。)

它在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)經(jīng)歷十幾年,被眾多科研工業(yè)客戶反復(fù)選擇,也是細(xì)胞典藏等重大項(xiàng)目十幾年的供應(yīng)品牌


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